miRNA-mRNA形成的功能環(huán)或?qū)⒊蔀樾》肿铀幬锇l(fā)現(xiàn)的潛在靶點(diǎn)
2020年5月28日，來自南方醫(yī)科大學(xué)的Aiping Lu教授，香港浸會(huì)大學(xué)的Ge Zhang教授和香港中文大學(xué)的Bao-Ting Zhang教授聯(lián)合發(fā)表了題為：“A Loop-Based and AGO-Incorporated Virtual Screening Model Targeting AGO-Mediated miRNA–mRNA Interactions for Drug Discovery to Rescue Bone Phenotype in Genetically Modified Mice”的文章。研究建立了一種基于miRNA-mRNA形成的loop和AGO蛋白的虛擬篩選模型。通過虛擬模型，分別選擇前10個(gè)候選miR-214-ATF4 mRNA相互作用小分子和前10個(gè)候選miR-214-TRAF3 mRNA相互作用小分子。體外和體內(nèi)數(shù)據(jù)顯示，一個(gè)小分子靶向miR-214-ATF4 mRNA促進(jìn)ATF4蛋白表達(dá)，增強(qiáng)成骨潛能，而另一個(gè)小分子靶向miR-214-TRAF3 mRNA促進(jìn)TRAF3蛋白表達(dá)，抑制破骨細(xì)胞活性。這些數(shù)據(jù)表明，基于loop和AGO蛋白的虛擬篩選模型可以篩選得到與miRNA-mRNA相互作用的小分子。
在這篇文章中，云克隆ELISA試劑盒（Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽（Cross Linked C-Telopeptide Of Type I Collagen, CTX1）kits，CEA665Mu）再次受到了科研工作者們的認(rèn)可。
產(chǎn)品：Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽 ELISA Kit
貨號(hào)：CEA665Mu
實(shí)驗(yàn)方法：競(jìng)爭(zhēng)抑制
檢測(cè)范圍：39.06-10,000pg/mL
研究介紹：
MicroRNA是內(nèi)源性單鏈非編碼RNA，它調(diào)控著上百條基因的表達(dá)并在一系列的生理生化過程中扮演重要角色。近來，有研究提出Inforna法篩選小分子互作的靶向RNA。然而，因?yàn)橐粋€(gè)miRNA可以調(diào)控許多種靶向mRNA，所以 Inforna法針對(duì)靶向pri-miRNA（Primary miRNA, pri-miRNA）的篩選缺乏針對(duì)性。
成熟miRNA及其特異性靶向mRNA在Argonaute（AGO）蛋白介導(dǎo)的miRNA-mRNA相互作用中形成獨(dú)特的功能環(huán)，可能成為小分子藥物發(fā)現(xiàn)的潛在靶點(diǎn)。我們的研究進(jìn)一步表明這種環(huán)狀結(jié)構(gòu)具有結(jié)構(gòu)獨(dú)特性、功能重要性、高穩(wěn)定性和高特異性。因此，可以假設(shè)miRNA與其靶mRNA形成的環(huán)作為藥物發(fā)現(xiàn)的靶點(diǎn)。此外，由于miRNA-mRNA構(gòu)象的改變可能導(dǎo)致AGO的裂解活性改變，研究進(jìn)一步計(jì)算了虛擬模型中候選小分子結(jié)合前后的AGO-miRNA-mRNA復(fù)合物的能量變化，以提高篩選準(zhǔn)確性。
此外，之前發(fā)表的研究發(fā)現(xiàn)miR-214可以與ATF4靶向結(jié)合抑制成骨形成，與TRAF3靶向結(jié)合促進(jìn)破骨細(xì)胞活性。因此，基于算法分別篩選出10個(gè)可能與miRNA-214-ATF和miRNA-214-TRAF3相互作用的小分子，用biotin標(biāo)記的miRNA-214與小分子進(jìn)行體外培養(yǎng)，LC-MS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有4個(gè)預(yù)測(cè)與ATF互作的小分子和3個(gè)與TRAF3互作的小分子能檢測(cè)到信號(hào)。使用MC3T3-E1和RAW264.7細(xì)胞種過表達(dá)miR-214，之后分別于篩選出的小分子結(jié)合，發(fā)現(xiàn)1個(gè)與ATF互作的小分子和1個(gè)與TRAF3互作的小分子可以高度結(jié)合AGO2。最后對(duì)這兩個(gè)小分子進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)以證明該篩選模型的有效性。
