2025年8月南方醫(yī)科大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)在《Cancer Research》發(fā)表了題為“Tumor-derived CCL16 Normalizes Tumor Vasculature through Macrophage ICAM-1 Receptor and Enhances Immunotherapy Efficacy in Hepatocellular Carcinoma”的文章。

肝細(xì)胞癌（HCC）以異常腫瘤血管和免疫抑制性腫瘤微環(huán)境（TME）為特征，這兩者不僅會削弱免疫治療效果，還會促進(jìn)循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）擴(kuò)散和免疫逃逸。本研究通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CCL16缺失會加劇血管功能障礙和免疫抑制性TME形成，而過表達(dá)CCL16可介導(dǎo)血管正?；?/span>（TVN）并促進(jìn)免疫細(xì)胞浸潤。機(jī)制上，CCL16與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上的ICAM-1受體相互作用，觸發(fā)JAK2-STAT6通路激活并誘導(dǎo)IL-24分泌。使用DPP4抑制劑（西格列汀）進(jìn)行藥物干預(yù)，可通過防止CCL16降解，有效穩(wěn)定腫瘤血管。重要的是，提升CCL16水平聯(lián)合抗PD1抗體給藥，在HCC模型中協(xié)同增強(qiáng)血管正?；⒏纳瓶鼓[瘤免疫，從而抑制腫瘤生長。這些發(fā)現(xiàn)確立了CCL16作為血管-免疫互作的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，并提出DPP4抑制是治療HCC的潛在策略。

圖1. CCL16-ICAM1-JAK2/STAT6-IL24信號軸在肝癌血管免疫調(diào)控中的核心作用

（圖片源于《Cancer Research》）

該研究中使用的CCL16、VEGF-A和ANG-2 ELISA kits均來源于云克隆。

1. 多組學(xué)分析鑒定出介導(dǎo)HCC中血管-免疫互作的關(guān)鍵樞紐分子

CTC可作為HCC轉(zhuǎn)移的早期標(biāo)志物，異常的腫瘤血管系統(tǒng)和免疫抑制性TME促進(jìn)了CTC侵入脈管系統(tǒng)及其遠(yuǎn)處播散。CD31⁺α-SMA⁺血管密度增加提示血管完整性改善和腫瘤血管系統(tǒng)正?；?/span>。研究發(fā)現(xiàn)高CTC（CTC-high）組CD31⁺α-SMA⁺顯著降低，同時(shí)CD86⁺抗腫瘤巨噬細(xì)胞、CD8⁺ T細(xì)胞和NK細(xì)胞浸潤明顯減少，說明CTC-high負(fù)荷的HCC組織具有血管結(jié)構(gòu)異常和免疫抑制性TME的特征，二者協(xié)同作用構(gòu)成了CTC免疫逃避的核心驅(qū)動機(jī)制。通過高通量測序、數(shù)據(jù)集整合及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)CCL16是核心模塊中的關(guān)鍵基因之一，提示CCL16可能是TME中血管-免疫交叉對話的潛在調(diào)控因子。研究人員構(gòu)建了CCL16敲低的Hepa1-6細(xì)胞系，體內(nèi)外結(jié)果均表明CCL16是協(xié)調(diào)HCC腫瘤血管重塑和TIME（腫瘤免疫微環(huán)境）相互作用的關(guān)鍵介質(zhì)。

圖2. CCL16是HCC中血管-免疫互作的關(guān)鍵樞紐分子

（圖片源于《Cancer Research》）

2. CCL16促進(jìn)TVN并逆轉(zhuǎn)HCC中的免疫抑制性腫瘤微環(huán)境

為進(jìn)一步闡明CCL16在HCC中的作用，構(gòu)建了CCL16過表達(dá)的Huh7細(xì)胞（LV-CCL16）及對照細(xì)胞（LV-Ctrl）。在裸鼠皮下移植瘤模型中，LV-CCL16組的腫瘤生長速度和瘤體重量顯著慢于LV-Ctrl組，且表現(xiàn)為α-SMA⁺周細(xì)胞覆蓋率升高和lectin⁺CD31⁺功能性血管比例顯著增加，表明CCL16能促進(jìn)腫瘤血管形成更穩(wěn)定、功能更完善的結(jié)構(gòu)，該結(jié)論在CCL16敲低模型中得到進(jìn)一步驗(yàn)證。研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步探討外源性重組CCL16（rCCL16）在調(diào)控腫瘤血管和TIME方面的治療潛力，發(fā)現(xiàn)rCCL16顯著抑制了HCC進(jìn)展并提升了腫瘤血管灌注效率，同時(shí)腫瘤組織中效應(yīng)免疫細(xì)胞浸潤增加和調(diào)節(jié)性T減少。這些結(jié)果表明外源性CCL16通過雙重機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用——協(xié)同促進(jìn)腫瘤TVN和免疫激活，為開發(fā)HCC血管-免疫雙向調(diào)控治療策略提供了新依據(jù)。

圖3. CCL16促進(jìn)TVN并逆轉(zhuǎn)HCC中的免疫抑制性腫瘤微環(huán)境

（圖片源于《Cancer Research》）

3. CCL16調(diào)控巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的TVN

既往研究證實(shí)CCL16通過CCR1（C-C趨化因子受體1）受體信號傳導(dǎo)發(fā)揮促血管生成作用，但使用CCR1拮抗劑（ZK811752）處理的LV-CCL16裸鼠皮下移植瘤模型顯示腫瘤血管灌注仍然可以維持，即該效應(yīng)不依賴于CCR1。TIMER免疫浸潤分析發(fā)現(xiàn)CCL16表達(dá)與巨噬細(xì)胞浸潤呈顯著正相關(guān)，功能評估表明LV-CCL16+PBS處理可增強(qiáng)血管灌注、減少血管滲漏并改善組織供氧，而這些效應(yīng)在巨噬細(xì)胞被清除后均消失。以上結(jié)果確立了巨噬細(xì)胞作為CCL16驅(qū)動TVN過程中不可或缺的介質(zhì)。

圖4. CCL16調(diào)控巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的TVN

（圖片源于《Cancer Research》）

4. CCL16通過ICAM-1介導(dǎo)的分子機(jī)制促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化與TVN

rCCL16刺激的M0巨噬細(xì)胞的RNA測序發(fā)現(xiàn)包括IL24、IL36G、IL1A、IL1B、CXCL3、CXCL5和CXCL6在內(nèi)的分泌因子顯著上調(diào)，其中IL24誘導(dǎo)程度最高。在THP-1細(xì)胞中，ICAM-1阻斷可完全抑制rCCL16驅(qū)動的IL24表達(dá)。免疫熒光和蛋白印跡顯示rCCL16以時(shí)間依賴性方式誘導(dǎo)STAT6磷酸化，同時(shí)上調(diào)p-JAK2、p-STAT6和IL-24水平。這些效應(yīng)可被ICAM-1抗體或STAT6抑制劑（AS1517499）逆轉(zhuǎn)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)中和IL-24抗體、AS1517499或ICAM-1阻斷會逆轉(zhuǎn)CCL16過表達(dá)的抑瘤效應(yīng)。這些結(jié)果闡明CCL16-ICAM-1-JAK2/STAT6-IL24軸是巨噬細(xì)胞驅(qū)動TVN和腫瘤抑制的核心機(jī)制。

圖5. CCL16通過ICAM-1介導(dǎo)的分子機(jī)制促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化與TVN

（圖片源于《Cancer Research》）

5. CCL16在HCC微環(huán)境中的降解及DPP4抑制劑的治療潛力

為探究CCL16在HCC中下調(diào)的機(jī)制，研究了致癌驅(qū)動因子是否促進(jìn)CCL16降解?；诩韧芯匡@示DPP4抑制劑可升高趨化因子CCL11的濃度，因此提出假設(shè)：在HCC中過表達(dá)的DPP4介導(dǎo)了CCL16的蛋白水解過程。分子對接預(yù)測顯示DPP4與CCL16之間存在空間相互作用。在HCCLM3和HepG2細(xì)胞中過表達(dá)DPP4可顯著降低胞內(nèi)外CCL16水平，證實(shí)其降解作用，而DPP4抑制劑處理Huh7細(xì)胞后，胞內(nèi)外的CCL16水平得以恢復(fù)，證明DPP4抑制劑能穩(wěn)定CCL16。通過DPP4抑制劑處理的Huh7細(xì)胞條件培養(yǎng)基（CM）評估功能變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，該CM能刺激M0巨噬細(xì)胞上調(diào)p-JAK2和p-STAT6，重新激活CCL16-ICAM1-JAK2/STAT6通路。皮下移植瘤模型顯示DPP4抑制劑或rCCL16均可抑制腫瘤生長和重量，而抗CCL16抗體與DPP4抑制劑聯(lián)合治療則逆轉(zhuǎn)該效應(yīng)，證實(shí)DPP4抑制劑的療效依賴于CCL16。功能學(xué)血管分析表明，DPP4抑制劑顯著提升灌注效率、降低血管滲漏并緩解缺氧。這些效應(yīng)與rCCL16介導(dǎo)的TVN作用相當(dāng)，但在CCL16被阻斷后基本消失。

圖6. CCL16在HCC微環(huán)境中的降解及DPP4抑制劑的治療潛力

（圖片源于《Cancer Research》）

6. CCL16在HCC中的臨床意義及聯(lián)合治療策略探索

單純TVN可能不足以在晚期HCC中實(shí)現(xiàn)最佳抗腫瘤療效，因此評估其與抗PD-1免疫治療的協(xié)同作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用慢病毒介導(dǎo)的LV-CCL16細(xì)胞系進(jìn)行不同治療方案干預(yù)，發(fā)現(xiàn)LV-CCL16誘導(dǎo)的TVN可適度增強(qiáng)抗腫瘤活性，效果與抗PD-1單藥治療相當(dāng)，且LV-CCL16與抗PD-1組表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤抑制效果。流式結(jié)果顯示抗PD-1單藥治療對TIME改善有限，而LV-CCL16+抗PD-1組表現(xiàn)出最顯著的TIME改善,并達(dá)到最大灌注效率。

為評估CCL16在HCC中的臨床意義，對正常和HCC肝組織中的蛋白和基因進(jìn)行檢測以及血清中的CCL16進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)HCC組CCL16的蛋白和mRNA水平明顯下降且血清CCL16濃度顯著降低。對HCC患者的Kaplan-Meier生存分析顯示，高CCL16表達(dá)與改善的總生存期相關(guān)。TIMER數(shù)據(jù)庫的補(bǔ)充分析表明，同時(shí)具有高CCL16表達(dá)和巨噬細(xì)胞富集的HCC患者生存期最長。綜上所述，CCL16驅(qū)動的腫瘤TVN與PD-1阻斷的協(xié)同聯(lián)合，代表了一種變革性策略，可增強(qiáng)HCC免疫治療效果，為解決晚期HCC治療耐藥的臨床挑戰(zhàn)提供了新方向。

圖7. CCL16在HCC中的臨床意義及聯(lián)合治療策略探索

（圖片源于《Cancer Research》）

云克隆開發(fā)了涉及上述研究相關(guān)靶標(biāo)的蛋白、抗體以及試劑盒產(chǎn)品，靶標(biāo)及核心貨號如下，供參考：